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    精浆柠檬酸定量试剂盒的一些使用方法简述
    点击次数:30 发布时间:2019-03-13
       精浆柠檬酸定量试剂盒特点
     
      准确灵敏:试管法检测范围为 20 - 2000 μg/ml,如果在 60℃进行增色反应,检测范围可达 5 - 250 μg /ml;微孔板法的检测范围为 25 - 500 μg/ml。
     
      操作简单:所需样品少,检测试剂少,操作简捷,30 分钟内完成测定。
     
      兼容性好:不受样品中大多数离子型和非离子型表面活性剂的影响。
     
      稳定性好:BCA 试剂 (A 和 B)在室温可稳定保存 12 个月;BCA 工作液可在室温稳定保存一周;显色反应产物在 1 小时内比色测定,吸收值稳定。
     
      使用方便:提供微孔板法和试管法测定两种检测方法,方便用户选择。
     
      精浆柠檬酸定量试剂盒使用方法
     
      1. 按需用量配制适量BCA工作液 (可在室温稳定保存一周)。BCA试剂A与BCA试剂B以体积比50:1混合,充分混匀。
     
      2. 配制标准蛋白溶液(参照附表2配制),并以蒸馏水作为空白对照。
     
      3. 将样品作适当稀释,稀释液需与标准品的稀释液一致,可用1 × PBS或蒸馏水进行稀释,样品建议作梯度倍比稀释,如2倍、4倍、8倍等稀释。
     
      4. 根据实验方案,选择以下其中一种方法进行测试。
     
      4.1微孔板法
     
      ⑴ 分别取20 μl不同浓度标准蛋白溶液、待测样品以及空白对照(蒸馏水)分别置于各孔,为测定准确每个加样孔均应做复孔。
     
      ⑵ 每孔分别加入200 μl BCA工作液,轻微震荡混匀,动作不可剧烈,避免交叉污染。
     
      ⑶ 封上微孔板,放置37℃反应30分钟 (对于低浓度样品的检测也可37℃反应2小时,以提高562 nm波长吸收值,增强检测灵敏度)。
     
      ⑷ 取出微孔板恢复至室温,采用 562 nm 波长酶标仪比色。
     
      ⑸ 计算出每孔标准蛋白和待测样品的实际吸收值(即标准品吸收值-空白平均吸收值),然后计算出复孔平均吸收值。
     
      ⑹ 绘制标准蛋白曲线。通过标准曲线回归公式,计算出待测样品的蛋白浓度。
     
      4.2 试管法
     
      ⑴ 分别取50 μl不同浓度标准蛋白溶液、待测样品以及空白对照(蒸馏水)置于1.5 ml干净的Eppendorf管,并作好标记(建议每管均应做2 - 3个平行反应)。
     
      ⑵ 每管分别加入1 ml BCA工作液,立即混匀。
     
      ⑶ 放置37℃反应30分钟(如果放置60℃反应30分钟,最低检测蛋白浓度可达5 μg/ml)。
     
      ⑷ 试管恢复至室温,采用562 nm波长比色(使用0.5厘米光程比色杯),以空白对照管调零,然后进行标准蛋白和待测样品比色测定。
     
      ⑸ 计算出标准蛋白与待测样品复管平均吸收值。
     
      ⑹ 绘制标准蛋白曲线。通过标准曲线回归公式,计算出待测样品的蛋白浓度。
     
      精浆柠檬酸定量试剂盒注意事项
     
      1. 请在使用本产品前仔细阅读说明书。本产品仅用于科研,不可用于诊断。
     
      2. 为了您的安全和健康,请穿戴实验防护服、手套、口罩等必要的防护装备。
     
      3. 每次使用前请检查试剂是否出现沉淀。如果有沉淀,请在37℃温浴,溶解沉淀后再使用。如果有任何试剂出现变色或微生物污染即丢弃。
     
      4. BCA法测定蛋白浓度时,吸光度会随时间的延长不断加深,因此所有样品的测定需在10分钟内完成,否则会影响蛋白定量的准确度。
     
      5. 待测样品中如含有较高浓度的非离子型表面活性剂,普通Lowry法会因反应液出现沉淀而无法检测,BCA检测法则不会有此情况发生,但是会导致待测样品显色反应加深,仍将产生测定误差。
     
      6. 待测样品中如含有鳌合剂,或处于强酸、强碱条件则会导致负吸收值。
     
      7. 如含有脂类物质会导致吸收值明显升高。
     
      8. 如因上述干扰因素存在,造成测定误差,请通过稀释、透析或其他处理方式,使干扰物质浓度降至BCA检测最大兼容浓度以下,或选用联科生物生产的抗干扰蛋白定量试剂盒直接进行测定。
     
      9. 如果酶标仪没有562 nm检测波长,540 - 590 nm之间的波长也可接受。
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