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          小鼠核因子κB受体活化因子配基试剂盒样本处理办法
          点击次数:69 发布时间:2019-03-21
             小鼠核因子κB受体活化因子配基试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中仓鼠核因子κB受体活化因子配基(RANKL) 水平。用纯化的仓鼠核因子κB受体活化因子配基(RANKL) 抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入核因子κB受体活化因子配基(RANKL) ,再与HRP标记的核因子κB受体活化因子配基(RANKL) 抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的核因子κB受体活化因子配基(RANKL) 呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中仓鼠核因子κB受体活化因子配基(RANKL) 浓度。
           
            小鼠核因子κB受体活化因子配基试剂盒样本处理及要求:
           
            1、血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
           
            2、血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
           
            3、尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
           
            4、细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
           
            5、组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
           
            6、标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。
           
            7、小鼠核因子κB受体活化因子配基试剂盒不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
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